一、水體毒性及其檢測的重要性

在日常生活中，水體污染事件時(shí)有發(fā)生，導(dǎo)致水體具有毒性。當(dāng)遇到水源水、地下水、湖泊河流等水體污染時(shí)，若無法確定污染源，水質(zhì)檢測人員首要任務(wù)是確定水體是否具有毒性，毒性程度如何，以及對誤食、誤飲的生物是否具有危害性。國家對水質(zhì)急性毒性限值及檢測有相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，目前常用的檢測方法包括斑馬魚卵法和發(fā)光細(xì)菌法。

發(fā)光細(xì)菌法檢測原理

發(fā)光細(xì)菌法基于發(fā)光細(xì)菌與水樣接觸后發(fā)光強(qiáng)度的變化來評估水樣的急性毒性。水樣中的毒性組分與發(fā)光細(xì)菌接觸后，會(huì)抑制細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度，且這種抑制率與毒性組分的總濃度呈負(fù)相關(guān)。通過生物發(fā)光光度計(jì)測定水樣與發(fā)光細(xì)菌接觸一定時(shí)間后的發(fā)光抑制率，可表征水樣的急性毒性水平。

二、檢測所需試劑與儀器

（一）檢測試劑

實(shí)驗(yàn)室超純水：常溫保存。

氯化汞母液（2000 mg/L）。

復(fù)蘇稀釋液（0.85%的氯化鈉溶液）。

滲透壓液（17%的氯化鈉溶液）。

青海弧菌蠶67。

（二）檢測儀器

生物發(fā)光光度計(jì)：技術(shù)規(guī)格包括可探測光譜范圍320 nm～1000 nm；探測結(jié)果范圍0～65535 RLU；最快檢測時(shí)間5分鐘；相對發(fā)光強(qiáng)度0-200%；可進(jìn)行ATP測試；測試試管規(guī)格為5 mL的反應(yīng)試管和10 mL的測試試管。

叁、檢測條件

（一）室溫條件

室溫應(yīng)控制在20-25℃，同一批樣品在測試過程中要求溫度波動(dòng)不超過±1℃。所有測試器皿及試劑、溶液在測試前1小時(shí)均需置于控溫的測試室內(nèi)。

（二）辮貶條件

若需測定包括辮貶影響在內(nèi)的急性毒性，不應(yīng)調(diào)節(jié)水樣辮貶。

若需測定排除pH影響在內(nèi)的急性毒性，需將水樣和復(fù)蘇液（氯化鈉0.85 g/100 mL）pH調(diào)至以下值：主要含銅的水樣為4.5，主要含其他金屬水樣為5.4，主要含有機(jī)化合物水樣為7.0。

四、水樣毒性檢測步驟

（一）排列檢測試管

在塑料或鐵制試管架上按以下要求排列試管：

第一排：依次為反應(yīng)管01-標(biāo)準(zhǔn)品、反應(yīng)管02-陰性/陽性質(zhì)控和反應(yīng)管03-水樣。

第二排：依次為測試管01-標(biāo)準(zhǔn)品、測試管02-陰性/陽性質(zhì)控和測試管03-水樣。

（二）青海弧菌蠶67凍干粉劑復(fù)蘇

從冷凍環(huán)境（-18℃）中取出青海弧菌Q67凍干粉（含量約為0.0015-0.0018 g）小瓶，在常溫環(huán)境（25℃左右）下放置15分鐘，啟開并輕敲小瓶，確保凍干細(xì)菌充分落在小瓶底部。移取0.5 mL 0.85%的復(fù)蘇液或3%的復(fù)蘇液至菌種中，搖勻，放置10分鐘后可以使用。

（叁）檢測步驟

打開生物發(fā)光光度計(jì)電源，預(yù)熱15分鐘，調(diào)零，備用。

分別往三支反應(yīng)試管中加入2 mL的標(biāo)準(zhǔn)品（稀釋液），2 mL（1:19-稀釋液：樣品）的陰性質(zhì)控及2 mL（1:19-稀釋液：樣品）的被測水樣。

待凍干粉復(fù)蘇時(shí)間到后，分別往反應(yīng)管中加入50 ?L凍干粉復(fù)蘇試劑（注意混勻）。

混勻后，等待15分鐘反應(yīng)時(shí)間。

分別從反應(yīng)試管中移取350 ?L混合液至測試管中（注意盡量不要濺到瓶壁上）。

將測試試管按順序分別放入主機(jī)中，最終結(jié)果以擱嘗濱%發(fā)光強(qiáng)度表示。

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