檢測原理

高效液相色譜法（貶筆嘗頒）是檢測地表水、地下水及污水中聯(lián)苯胺的常用方法。其原理基于水樣通過陽離子交換固相萃取柱時(shí)，聯(lián)苯胺被吸附。隨后，利用乙酸溶液將聯(lián)苯胺鎖定在柱上，以甲醇淋洗去除雜質(zhì)，再用氨水甲醇溶液洗脫。洗脫液經(jīng)濃縮定容后，通過配備熒光檢測器的高效液相色譜進(jìn)行分離檢測。檢測依據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

實(shí)驗(yàn)試劑

鹽酸：1.19 g/ml。

冰醋酸：1.05 g/ml。

氨水：0.91 g/ml，優(yōu)級(jí)純。

氫氧化鈉。

硫代硫酸鈉。

乙酸銨：色譜純。

聯(lián)苯胺：99.6%。

甲醇：液相色譜純。

乙醇。

乙腈：液相色譜純。

鹽酸溶液：1+1。

甲醇水溶液：1+1。

乙酸銨溶液：0.01 mol/L。稱取0.77 g乙酸銨，用水溶解后定容至1 L。

乙酸溶液：3+97。量取3 ml冰醋酸和97 ml水，混勻備用。

氫氧化鈉溶液：1 mol/L。稱取4 g氫氧化鈉，用水溶解后定容至100 ml。

氨水甲醇溶液：5+95。量取5 ml氨水和95 ml甲醇，混勻備用。

聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液：1000 ?g/ml。稱取0.050 g（精確到0.1 mg）聯(lián)苯胺于50 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至標(biāo)線，轉(zhuǎn)移至內(nèi)襯聚四氟乙烯墊的螺口棕色試劑瓶中保存。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年，也可直接購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。

聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)中間液：100 ?g/ml。準(zhǔn)確移取1.00 ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容至標(biāo)線。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年。

聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液I：10.0 ?g/ml。準(zhǔn)確移取1.00 ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標(biāo)線。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存3個(gè)月，使用前應(yīng)放至室溫并混勻。

聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液II：1.00 ?g/ml。準(zhǔn)確移取1.00 ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液I于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標(biāo)線。臨用現(xiàn)配。

固相萃取柱：混合型陽離子交換固相萃取柱，填料為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯樹脂，150 mg/6 ml，或其他等效萃取柱。

濾膜：0.45 ?m聚四氟乙烯濾膜。

氮?dú)猓杭兌取?9.99%。

檢測儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：配備熒光檢測器。

色譜柱：填料粒徑為5 ?m，柱長15 cm，內(nèi)徑4.6 mm的C18反相色譜柱，或其他等效色譜柱。

樣品瓶：500 ml具磨口塞的棕色細(xì)口玻璃瓶或帶聚四氟乙烯襯墊的棕色螺紋口玻璃瓶。

微量注射器：10 ?l、50 ?l和100 ?l。

氮吹儀。

超聲波清洗儀：輸出功率在180 W以上，工作頻率為40 kHz。

固相萃取裝置。

檢測水樣采集

采樣前向樣品瓶中加入硫代硫酸鈉，每500 ml樣品加入40 mg。采樣時(shí)，應(yīng)使樣品充滿采樣瓶，不留液上空間。如果樣品的pH不在6-9之間，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6-9。采集的樣品應(yīng)在4°C以下冷藏、避光保存，5天內(nèi)完成萃取。萃取后的洗脫液在4°C以下冷藏、避光保存，4天內(nèi)完成分析。

水樣的制備

固相萃取柱的活化

將固相萃取柱固定在固相萃取裝置上，先用5 ml甲醇以約2 ml/min的流速通過固相萃取柱。在填料暴露于空氣之前，向柱上加5 ml水，待水剩約2 ml時(shí)，停止活化。

富集、凈化與濃縮

量取150 ml水樣置于250 ml錐形瓶中，以約2 ml/min的流速通過活化后的固相萃取柱。水樣完全富集后，加入5 ml乙酸溶液，待乙酸溶液完全流出后，加入8 ml甲醇淋洗，待甲醇完全流出后，繼續(xù)用真空泵抽吸5分鐘。用7 ml氨水甲醇溶液洗脫，洗脫液收集到濃縮瓶中。然后將濃縮瓶置于氮吹儀上，在60°C濃縮至1 ml，再用水定容至2.0 ml，混勻后經(jīng)濾膜過濾到棕色水樣瓶中，待測。

空白試樣的制備

用實(shí)驗(yàn)用水代替水樣，按照與試樣的制備相同步驟進(jìn)行空白試樣的制備。

具體檢測步驟

色譜參考條件

流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：乙酸銨溶液。洗脫程序?yàn)榈榷认疵�，流�?dòng)相A/流動(dòng)相B=20/80（V/V），流速：1.0 ml/min；柱溫：40°C；激發(fā)波長：292 nm，檢測波長：395 nm；進(jìn)樣體積：40.0 ?l。

建立校準(zhǔn)曲線

分別取適量的聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液I或聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液II，用甲醇水溶液稀釋，制備至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，聯(lián)苯胺的質(zhì)量濃度分別為2.00 ?g/L、5.00 ?g/L、10.0 ?g/L、50.0 ?g/L、100 ?g/L、200 ?g/L（此為參考濃度）。按照色譜參考條件，由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以聯(lián)苯胺的質(zhì)量濃度（?g/L）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。

水樣的測定

被檢測水樣及空白試樣可以按照與校準(zhǔn)曲線的建立相同的條件進(jìn)行試樣的測定。

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