高效液相色譜法（貶筆嘗頒）是一種高效、靈敏的分析技術，廣泛應用于檢測水中的有機污染物。下面將詳細介紹使用高效液相色譜法檢測水中萘酚含量的方法，包括樣品處理、儀器條件、標準曲線建立、定性與定量分析等步驟。此方法適用于地表水、生活污水和工業(yè)廢水中的萘酚測定，具有高靈敏度和高選擇性的特點。

一、檢測原理

高效液相色譜法檢測水中萘酚含量的原理是將一定量酸化后的樣品（辮貶=1-2）通過頒18固相萃取柱進行萃取，用甲醇洗脫。洗脫液中的萘酚經液相色譜分離后，使用熒光檢測器進行檢測。通過保留時間進行定性分析，使用外標法定量分析。此方法在特定條件下具有明確的檢出限和測定下限，確保了檢測結果的可靠性。

二、檢測所用試劑和材料

乙腈（頒貶?頒狽）：液相色譜純。

甲醇（頒貶?翱貶）：液相色譜純。

鹽酸：ρ（HCl）=1.18 g/ml。

抗壞血酸（頒?貶?翱?）。

1-萘酚：飛（頒??貶?翱貶）≥99.5%。

萘酚混合標準貯備液：ρ≈1000 mg/L。

分別稱取0.10 g（準確至0.0001 g）1-萘酚和2-萘酚于100 ml燒杯中，加入100 mg抗壞血酸，用少量甲醇溶解，轉移至100 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至標線，混勻。分裝于棕色樣品瓶中，密封，4℃以下避光冷藏，可保存3個月。也可購買市售有證標準溶液，按標準溶液證書要求保存。

萘酚混合標準使用液Ⅰ：ρ=100 mg/L。

量取適量萘酚混合標準貯備液于10 ml容量瓶中，用甲醇定容，混勻。分裝于棕色樣品瓶中，密封，4℃以下避光冷藏，可保存3個月。

萘酚混合標準使用液Ⅱ：ρ=10.0 mg/L。

量取1.00 ml萘酚混合標準使用液Ⅰ于10 ml容量瓶中，用甲醇定容，混勻。分裝于棕色樣品瓶中，密封，4℃以下避光冷藏，可保存3個月。

鹽酸溶液1+1。

鹽酸溶液：c=0.01 mol/L。

量取1.8 ml鹽酸溶液，用水稀釋至1000 ml。

固相萃取柱C18：填料為十八烷基鍵合硅膠，500 mg/6 ml。

微孔濾膜：0.45 ?m，有機相。

叁、檢測需要用的儀器

高效液相色譜儀：配有多通道熒光檢測器。

色譜柱：250 mm（長）×4.6 mm（內徑）×5 ?m（粒徑），填料為十八烷基鍵合硅膠（C18）或其他等效液相色譜柱。

棕色采樣瓶：250 ml或500 ml帶聚四氟乙烯襯墊的螺旋蓋玻璃瓶或磨口瓶。

棕色樣品瓶：2 ml、10 ml或50 ml帶聚四氟乙烯襯墊的螺旋蓋玻璃瓶。

氣密性玻璃注射器：5 ml或10 ml，與微孔濾膜配合使用。

固相萃取裝置。

四、檢測水樣的制備

將C18固相萃取柱固定在固相萃取裝置上，依次用9 ml甲醇和9 ml鹽酸溶液活化固相萃取柱，始終保持柱頭浸潤。

將樣品平衡至室溫，搖勻，量取10.0 ml - 50.0 ml樣品（可根據樣品中目標化合物含量，適當增加或減少取樣量）于樣品瓶中，然后使樣品以3-4 ml/min流速通過萃取柱。

在柱填料剛好暴露于空氣之前，用5 ml水，分2次沖洗樣品瓶，洗滌液一并轉移至柱上，棄去流出液，加壓擠出或抽干萃取柱中的水分。

用10.0 ml甲醇洗脫，接收洗脫液，待初始洗脫液流出后，關閉活塞，浸泡固相萃取柱至少5分鐘。打開活塞，收集全部洗脫液于10 ml棕色樣品瓶中，搖勻，用微孔濾膜過濾，待測。

五、水樣檢測步驟

儀器參考條件：

流動相：乙腈/水（含0.2%甲醇）=47/53

流量：1.2 ml/min

進樣體積：10.0 ?l

柱溫：35℃

檢測器：熒光檢測器

激發(fā)波長：228 nm

發(fā)射波長：

同時測定1-萘酚和2-萘酚時，選425 nm、435 nm或450 nm

只測定2-萘酚時，選360 nm、350 nm

將其中一個波長作為檢測波長，另一個作為輔助定性波長

標準系列的配制：

分別取適量萘酚標準使用液Ⅱ或標準使用液Ⅰ于10 ml棕色容量瓶中，以甲醇定容，配制能覆蓋水樣濃度范圍的至少包含5個濃度點的標準系列。標準系列溶液配制及其參考濃度見溶液配制及其參考濃度表。

標準曲線的建立：

按照儀器參考條件，由低濃度到高濃度對標準系列溶液依次進樣，分離、檢測目標化合物，記錄保留時間和峰高。

以各標準系列溶液中目標化合物的質量濃度（?駁/嘗）為橫坐標，以其對應的峰高為縱坐標，建立標準曲線。

檢測水樣：

準備好的水樣可以按照標準曲線建立中相同的儀器條件，按照水樣的制備步驟進行檢測。

定性分析：

根據保留時間定性，也可根據試樣中目標化合物在不同發(fā)射波長下的峰高比與標準水樣比較（其相對偏差應≤5%）輔助定性。必要時，可用液相色譜-質譜法確認。

定量分析：

用外標法定量。試樣中目標化合物的響應值不應超過標準曲線的上限。否則，應將水樣適當稀釋后再萃取或適當減少取樣量，計算時乘以稀釋倍數。

六、干擾和消除

水樣中的萘胺類等堿性有機化合物：

在酸性條件下（辮貶=1-2）固相萃取，以鹽離子的形式存在于水相中，不被頒18固相萃取柱吸附，不干擾萘酚的測定。

水樣中的多環(huán)芳烴類：

在本標準規(guī)定的條件下，其響應值很低，一般情況下不會干擾萘酚的測定。

其他在熒光檢測器上有響應的酸性和中性有機化合物：

可能會干擾萘酚的測定，可通過改變流動相的比例改善分離度，也可選擇在相對無干擾的檢測波長下測定避免干擾。

避免固相萃取柱穿透：

水樣中目標化合物總含量一般不應超過200 ?g。否則，應將水樣適當稀釋后再萃取或適當減少取樣量。

基體復雜、有機物含量未知的水樣：

為避免穿透，可以分別用兩根固相萃取柱萃取不同體積的同一個水樣。例如分別萃取10.0 ml和20.0 ml，當后者的測定結果低于前者的20%時，即說明后者的吸附容量已達到飽和，需適當減少取樣量或將水樣稀釋后再固相萃取。

清潔的水樣：

可用微孔濾膜過濾

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